木耳分离
木耳分离主要有以下几种方法：
孢子分离法
先用无菌水浸泡种耳，使其吸足水分。
切去基部，用脱脂棉吸干表面水珠，切成小块。
用无菌铁丝钩住，悬在预先制备的盛有培养基三角瓶的空间，或贴在培养皿和试管培养基正上方。
在25-28℃条件下培养3-4天，培养基上出现白色绒毛状菌丝，即为黑木耳菌丝体。
再经过2-3次转管纯化，得到纯净的黑木耳原种。
耳木分离法
将种木用75%的酒精棉球擦试表面，进行表面消毒杀菌。
用消毒小刀从中剖开，取其表面部分，将皮下1厘米内的木质组织，切成火柴头一般大小，移植到培养基平面上。
置于25-30℃条件下培养4-5天，待其长出菌丝后，再转管纯化，筛选出纯度高、菌丝生命力强、健壮的黑木耳菌珠。
耳基分离法
将性状好的子实体耳基进行组织分离。
先用水冲洗，然后在0.1%升汞液内浸泡1分钟。
切取米粒大小的组织块，共接种用。
组织分离法
选取无病虫害、肥厚健壮的新鲜黑木耳子实体，用蒸馏水洗净。
在接种箱内放入无菌水、无菌纱布、解剖刀、尖头镊子、烧杯、接种针、马铃薯葡萄糖琼脂培养基斜面试管等，经消毒后进行分离。
用无菌水冲洗子实体4-5次，用无菌纱布吸干子实体水分，用解剖刀将耳基部切开，用尖头镊子夹取小块组织接入培养基斜面试管内。
或将耳片撕开，用接种针轻轻刮取背瓣上的胶质，接入培养基斜面试管中，置25℃恒温箱内培养4-6天，从组织周围长出菌丝。
改进的组织分离法
制作培养皿或试管培养基，采用普通PDA培养基配方。
选择大小适中、成熟度略小的幼耳作为种耳。
对种耳进行严格消毒，包括用无菌水漂洗、酒精浸泡、漂白粉溶液浸泡等步骤。
将处理过的耳片剪取组织块置平板，加乳酸抑制细菌生长，提高分离成功率。
建议
选择合适的分离方法：根据具体需求和条件选择合适的分离方法，如孢子分离法适合大规模生产，耳木分离法适合小批量生产。
严格无菌操作：在整个分离过程中，必须保持无菌操作，避免杂菌污染。
控制培养条件：培养温度、湿度等条件要严格控制，以保证菌丝的正常生长。
多次纯化：初次分离后，需多次转管纯化，确保得到纯净的菌种。
通过以上方法，可以有效分离得到黑木耳的菌种，为黑木耳的栽培和生产提供可靠的菌源。